244240-24-2|LFM-A13,技术参数

2021-12-29

1. LFM-A13产品物理参数：

常用名	LFM-A13	英文名	LFM-A13
CAS号	244240-24-2	分子量	360.001
密度	1.9±0.1 g/cm3	沸点	487.9±45.0 °C at 760 mmHg
分子式	C11H8Br2N2O2	熔点	无资料
闪点	248.9±28.7 °C

2. LFM-A13技术资料：

体外研究	LFM-A13显着抑制BTK活性，IC50为6.2±0.3μg/ mL（= 17.2±0.8μM）。计算的BTK，JAK1，JAK3，IRK，EGFR和HCK的LFM-A13的Kis为1.4,110,148,31.6,166和214μM。 LFM-A13（200μM）显着增加ALL-1细胞对神经酰胺诱导的细胞凋亡的化学敏感性[1]。 LFM-A13（100μM）抑制Epo诱导的R10细胞中EpoR，Jak2，Btk，Stat5和Erk1 / 2的磷酸化。 LFM-A13（100μM）抑制Jak2，Tec和Btk的自磷酸化，而不是COS细胞中的Lyn激酶自磷酸化[2]。 LFM-A13有效抑制Plx1，IC50为10μM;也抑制BRK，BMX，FYN，IC50分别为267,281,240和215μM[4]。
体内研究	LFM-A13（25,50和100mg / kg）对大鼠没有明显的毒性。 LFM-A13（50mg / kg，每周三次，ip）减弱小鼠中DMBA诱导的乳腺肿瘤发生。 LFM-A13单独或与紫杉醇组合显示出对BMBB / c小鼠中DMBA诱导的乳腺肿瘤发生率，平均肿瘤数量，平均肿瘤重量和大小的显着影响。 LFM-A13（50 mg / kg，每周三次，腹腔注射）显着降低PLK1，cyclin D1，CDK-4，P53和Bcl-2的表达，但增加小鼠p21，IκB，Bax和caspase 3的表达。 [3]。 LFM-A13（200 mg / kg）不会对大鼠造成血液学毒性。 LFM-A13（10或50mg / kg，ip）在乳腺癌的MMTV / Neu转基因小鼠模型中表现出剂量依赖性的抗肿瘤作用[4]。
激酶实验	将纯化的His6-Plx1（250ng）加入到含有1x激酶缓冲液（10mM Tris-HCl，pH7.5,10mM MgCl2和1mM TT），25μM冷ATP和1μCi的20μL反应混合物中[ γ-32P] ATP在不同浓度的LFM-A13存在下，范围为5μg/ mL（13.9μM）至100μg/ mL（278μM）。将反应混合物在室温下温育15-30分钟，并通过加入2×SDS-PAGE还原样品缓冲液终止自磷酸化。在冷ATP存在下进行平行实验。然后使用市售的抗Plk抗体对激酶反应进行免疫印迹。免疫印迹证实每个反应中存在相同量的Plx1蛋白。此外，我们还检测了LFM-A13对Plx1对底物磷酸化的影响。简而言之，首先将250ng纯化的Plx1与不同浓度的LFM-A13在室温下孵育1小时。孵育1小时后，将含有反应混合物的试管置于冰上，加入底物，GST-Cdc25肽（254-316）（200ng），激酶缓冲液和[γ-32P] ATP并激活反应允许在室温下进行15分钟。用抗Cdc25抗体的免疫印迹用于证实在每种反应混合物中存在等量的底物肽。在测定中使用抗Plk抗体，谷胱甘肽-S-转移酶（GST）和ECL试剂盒的多克隆抗体。 LFM-A13的人PLK3抑制模式在滴定实验中使用增加浓度的[γ-32P] ATP和纯化的N-末端His6-标记的重组人PLK3，残基19-301，在Sf21昆虫细胞中由杆状病毒表达来检测。简言之，在25μL的最终反应体积中，将PLK3（h）（5-10mU）与8mM MOPS，pH 7.0,0.2mM EDTA，2mg / mL酪蛋白，10mM乙酸镁和[γ]一起温育。 -32P-ATP]（比活度约为500cpm / pmol，根据需要浓缩）。通过添加MgATP混合物引发反应。在室温下孵育40分钟后，通过加入5μL的3％磷酸溶液终止反应。然后将10微升反应物点在P30滤垫上，在75mM磷酸中洗涤3次，每次5分钟，在甲醇中洗涤一次，然后干燥并闪烁计数。 LFM-A13的PLK3的Ki由底物的磷酸化强度（1 / v）与抑制剂（i）的浓度（即LFM-A13）的倒数图计算。从这个Dixon图中，Ki表示EI复合体的解离常数，它由线性交点确定[4]。

3.LFM-A13同类产品列表：

中文名称	英文名称	CAS	包装	纯度
康普瑞汀	Combretastatin A4	117048-59-6	5mg	≥98%
中文名称	英文名称	CAS	包装	纯度
HSDVHK-NH2	P11	848644-86-0	1mg	≥98%
中文名称	英文名称	CAS	包装	纯度
MNS	MNS	1485-00-3	10mM (in 1mL DMSO)	≥98%
中文名称	英文名称	CAS	包装	纯度
依鲁替尼N-1	Btk inhibitor 1 R enantiomer	1022150-12-4	5mg	≥98%
中文名称	英文名称	CAS	包装	纯度
LFM-A13	LFM-A13	244240-24-2	10mg	≥98%
中文名称	英文名称	CAS	包装	纯度
Adaptaquin	Adaptaquin	385786-48-1	10mg	≥98%
中文名称	英文名称	CAS	包装	纯度
环(-RGDfK)	Cyclo (-RGDfK)	161552-03-0	5mg	≥98%
中文名称	英文名称	CAS	包装	纯度
LFM-A13	LFM-A13	244240-24-2	10mg	≥98%
中文名称	英文名称	CAS	包装	纯度
西仑吉肽	Cilengitide	188968-51-6	50mg	≥98%
中文名称	英文名称	CAS	包装	纯度
BIO5192	BIO 5192	327613-57-0	50mg	≥98%

4.LFM-A13生物活性：

描述	LFM-A13 是一种有效的 BTK，JAK2，PLK 抑制剂，可抑制 BTK，Plx1 和 PLK3 的活性，IC50 分别为 2.5 μM，10 μM 和 61 μM。
相关类别	信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> BTK
	信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> Polo样激酶(PLK)
	研究领域 >> 癌症
靶点	Plx1:10 μM (IC50)
	PLK3:61 μM (IC50)
	BRK:267 μM (IC50)
	BMX:281 μM (IC50)
	FYN:240 μM (IC50)
	Hepatocyte growth factor receptor kinase (Met):215 μM (IC50)
	BTK:2.5 μM (IC50)
体外研究	LFM-A13显着抑制BTK活性，IC50为6.2±0.3μg/ mL（= 17.2±0.8μM）。计算的BTK，JAK1，JAK3，IRK，EGFR和HCK的LFM-A13的Kis为1.4,110,148,31.6,166和214μM。 LFM-A13（200μM）显着增加ALL-1细胞对神经酰胺诱导的细胞凋亡的化学敏感性[1]。 LFM-A13（100μM）抑制Epo诱导的R10细胞中EpoR，Jak2，Btk，Stat5和Erk1 / 2的磷酸化。 LFM-A13（100μM）抑制Jak2，Tec和Btk的自磷酸化，而不是COS细胞中的Lyn激酶自磷酸化[2]。 LFM-A13有效抑制Plx1，IC50为10μM;也抑制BRK，BMX，FYN，IC50分别为267,281,240和215μM[4]。
体内研究	LFM-A13（25,50和100mg / kg）对大鼠没有明显的毒性。 LFM-A13（50mg / kg，每周三次，ip）减弱小鼠中DMBA诱导的乳腺肿瘤发生。 LFM-A13单独或与紫杉醇组合显示出对BMBB / c小鼠中DMBA诱导的乳腺肿瘤发生率，平均肿瘤数量，平均肿瘤重量和大小的显着影响。 LFM-A13（50 mg / kg，每周三次，腹腔注射）显着降低PLK1，cyclin D1，CDK-4，P53和Bcl-2的表达，但增加小鼠p21，IκB，Bax和caspase 3的表达。 [3]。 LFM-A13（200 mg / kg）不会对大鼠造成血液学毒性。 LFM-A13（10或50mg / kg，ip）在乳腺癌的MMTV / Neu转基因小鼠模型中表现出剂量依赖性的抗肿瘤作用[4]。
激酶实验	将纯化的His6-Plx1（250ng）加入到含有1x激酶缓冲液（10mM Tris-HCl，pH7.5,10mM MgCl2和1mM TT），25μM冷ATP和1μCi的20μL反应混合物中[ γ-32P] ATP在不同浓度的LFM-A13存在下，范围为5μg/ mL（13.9μM）至100μg/ mL（278μM）。将反应混合物在室温下温育15-30分钟，并通过加入2×SDS-PAGE还原样品缓冲液终止自磷酸化。在冷ATP存在下进行平行实验。然后使用市售的抗Plk抗体对激酶反应进行免疫印迹。免疫印迹证实每个反应中存在相同量的Plx1蛋白。此外，我们还检测了LFM-A13对Plx1对底物磷酸化的影响。简而言之，首先将250ng纯化的Plx1与不同浓度的LFM-A13在室温下孵育1小时。孵育1小时后，将含有反应混合物的试管置于冰上，加入底物，GST-Cdc25肽（254-316）（200ng），激酶缓冲液和[γ-32P] ATP并激活反应允许在室温下进行15分钟。用抗Cdc25抗体的免疫印迹用于证实在每种反应混合物中存在等量的底物肽。在测定中使用抗Plk抗体，谷胱甘肽-S-转移酶（GST）和ECL试剂盒的多克隆抗体。 LFM-A13的人PLK3抑制模式在滴定实验中使用增加浓度的[γ-32P] ATP和纯化的N-末端His6-标记的重组人PLK3，残基19-301，在Sf21昆虫细胞中由杆状病毒表达来检测。简言之，在25μL的最终反应体积中，将PLK3（h）（5-10mU）与8mM MOPS，pH 7.0,0.2mM EDTA，2mg / mL酪蛋白，10mM乙酸镁和[γ]一起温育。 -32P-ATP]（比活度约为500cpm / pmol，根据需要浓缩）。通过添加MgATP混合物引发反应。在室温下孵育40分钟后，通过加入5μL的3％磷酸溶液终止反应。然后将10微升反应物点在P30滤垫上，在75mM磷酸中洗涤3次，每次5分钟，在甲醇中洗涤一次，然后干燥并闪烁计数。 LFM-A13的PLK3的Ki由底物的磷酸化强度（1 / v）与抑制剂（i）的浓度（即LFM-A13）的倒数图计算。从这个Dixon图中，Ki表示EI复合体的解离常数，它由线性交点确定[4]。
动物实验	将携带一种或多种肿瘤的小鼠[4] Neu转基因小鼠随机置于研究中。为了评估肿瘤动力学，将荷瘤小鼠随机分配给载体对照组或治疗组。肿瘤生长通过每周三天用三维卡尺测量肿瘤来确定，并表示为立方毫米（mm 3）的肿瘤体积。使用长椭球体的体积公式计算肿瘤体积，V = 4/3×3.14×长度/ 2×宽度/ 2×深度/ 2。由于第0天转基因肿瘤体积的大的异质性，将每只小鼠的肿瘤生长标准化为该特定肿瘤的起始体积。因此，每只小鼠也作为其自身对照，并且产生肿瘤生长曲线以显示肿瘤体积的变化率。每周两次腹膜内注射LFM-A13（10或50mg / kg），每周连续5天。在第1,3,5,8,10和12天以6.7mg / kg的剂量水平腹膜内施用紫杉醇。吉西他滨在第1,8和15天以33.7mg / kg的剂量水平施用。将大鼠[4] Lewis大鼠保持在含有高压灭菌食物，水和寝具的微量过滤笼中。以多剂量水平静脉内注射LFM-A13治疗Lewis大鼠。 LFM-A13以含有10％DMSO作为载体的0.5mL推注给药。在第7天选择性地处死动物以通过评估多个器官中毒性病变的存在来确定LFM-A13的毒性。在用氯胺酮：甲苯噻嗪麻醉后通过心内穿刺收集血液并立即肝素化。使用HESKA Vet ABC-Diff血液学分析仪测定血细胞计数（红细胞[RBC]，白细胞[WBC]和血小板[Plt]）。在通过手动差异计数确定嗜中性粒细胞和淋巴细胞的百分比后，从WBC值计算绝对中性粒细胞计数（ANC）和绝对淋巴细胞计数（ALC）。对于载体对照和LFM-A13处理合并实验室参数的值，并且对于每个参数，使用学生t检验（载体与LFM-A13处理，不等方差，双尾）评估平均值之间的差异的统计学显着性。计算在Excel电子表格中执行。为了确定显着效果，使用Bonferroni方法调整p值以控制随机变化。对于组织病理学研究，将福尔马林固定组织脱水并通过常规方法包埋在石蜡中。制备具有固定的4-5微米组织切片的载玻片，并用苏木精和曙红染色。
参考文献	[1]. Mahajan S, et al. Rational design and synthesis of a novel anti-leukemic agent targeting Bruton's tyrosine kinase (BTK), LFM-A13 [alpha-cyano-beta-hydroxy-beta-methyl-N-(2, 5-dibromophenyl)propenamide]. J Biol Chem. 1999 Apr 2;274(14):9587-99.
	[2]. van den Akker E, et al. The Btk inhibitor LFM-A13 is a potent inhibitor of Jak2 kinase activity. Biol Chem. 2004 May;385(5):409-13.
	[3]. "Sahin K, et al. LFM-A13, a potent inhibitor of polo-like kinase, inhibits breast carcinogenesis by suppressing proliferation activity and inducing apoptosis in breast tumors of mice. Invest New Drugs. 2017 Nov 15."
	[4]. Uckun FM, et al. Anti-breast cancer activity of LFM-A13, a potent inhibitor of Polo-like kinase (PLK). Bioorg Med Chem. 2007 Jan 15;15(2):800-14. Epub 2006 Oct 26.

5.LFM-A13物理化学性质：

密度	1.9±0.1 g/cm3
沸点	487.9±45.0 °C at 760 mmHg
分子式	C11H8Br2N2O2
分子量	360.001
闪点	248.9±28.7 °C
精确质量	357.895233
PSA	73.12
LogP	3.42
外观性状	powder \| white
蒸汽压	0.0±1.3 mmHg at 25°C
折射率	1.677
储存条件	−20°C
水溶解性	DMSO: 15 mg/mL

6.LFM-A13急救措施：

① 必要的急救措施描述
一般的建议：请教医生。出示此安全技术说明书给到现场的医生看。
吸入：如果吸入,请将患者移到新鲜空气处。如果停止了呼吸,给于人工呼吸。请教医生。
皮肤接触：用肥皂和大量的水冲洗。请教医生。
眼睛接触：用水冲洗眼睛作为预防措施。
食入：切勿给失去知觉者从嘴里喂食任何东西。用水漱口。请教医生。
② 主要症状和影响，急性和迟发效应
据我们所知，此化学，物理和毒性性质尚未经完整的研究。
③ 及时的医疗处理和所需的特殊处理的说明和指示

7.LFM-A13消防措施：

① 灭火介质
灭火方法及灭火剂
用水雾,耐醇泡沫,干粉或二氧化碳灭火。
② 源于此物质或混合物的特别的危害
碳氧化物, 氮氧化物, 溴化氢气
③ 给消防员的建议
如必要的话,戴自给式呼吸器去救火。

8.LFM-A13泄露应急处理：

① 人员的预防,防护设备和紧急处理程序
使用个人防护设备。防止粉尘的生成。防止吸入蒸汽、气雾或气体。保证充分的通风。避免吸入粉尘。
② 环境保护措施
不要让产物进入下水道。
③ 抑制和清除溢出物的方法和材料
收集、处理泄漏物，不要产生灰尘。扫掉和铲掉。存放进适当的闭口容器中待处理。

9.LFM-A13操作处置与储存：

① 安全操作的注意事项
避免接触皮肤和眼睛。防止粉尘和气溶胶生成。
在有粉尘生成的地方,提供合适的排风设备。
② 安全储存的条件,包括任何不兼容性
贮存在阴凉处。容器保持紧闭，储存在干燥通风处。
建议的贮存温度： 2 - 8 °C

10.LFM-A13英文别名：

2-Butenamide, 2-cyano-N-(2,5-dibromophenyl)-3-hydroxy-, (2Z)-

a-Cyano-b-hydroxy-b-methyl-N-(2,5-dibromophenyl)propenamide

(2Z)-2-cyano-N-(2,5-dibromophenyl)-3-hydroxybut-2-enamide

trans-4,5-didehydro-neral

dehydrocitral

trans-dehydroneral

2,4,6-Octatrienal,3,7-dimethyl

(2Z)-2-Cyano-N-(2,5-dibromophenyl)-3-hydroxy-2-butenamide

货号	产品名称	品牌	规格型号	包装	目录价
A03-B5952	[APExBIO]LFM-A13,98% ,244240-24-2	APExBIO	98%	5mg	¥550.00
A03-B5952	[APExBIO]LFM-A13,98% ,244240-24-2	APExBIO	98%	10mg	¥700.00
A03-B5952	[APExBIO]LFM-A13,98% ,244240-24-2	APExBIO	98%	50mg	¥2800.00
A03-B5952	[APExBIO]LFM-A13,98% ,244240-24-2	APExBIO	98%	200mg	¥7000.00
PA57503	LFM-A13,99% ,244240-24-2	PERFEMIKER	99%	5mg	¥842.00
Sigma-L6920	[Sigma-Aldrich]抑制剂LFM-A13 ,244240-24-2	Sigma-Aldrich	≥98% (HPLC)	25MG	¥5071.68
Sigma-L6920	[Sigma-Aldrich]抑制剂LFM-A13 ,244240-24-2	Sigma-Aldrich	≥98% (HPLC)	5MG	¥1202.81